Existem duas fontes principais de contaminação em salas limpas: partículas e microrganismos, que podem ser causados por fatores humanos e ambientais, ou por atividades relacionadas ao processo. Apesar dos melhores esforços, a contaminação ainda pode penetrar na sala limpa. Os vetores de contaminação mais comuns incluem corpos humanos (células, cabelo), fatores ambientais como poeira, fumaça, névoa ou equipamentos (equipamentos de laboratório, equipamentos de limpeza), além de técnicas e métodos de limpeza inadequados.
O vetor de contaminação mais comum são as pessoas. Mesmo com as vestimentas mais rigorosas e os procedimentos operacionais mais estritos, operadores mal treinados representam a maior ameaça de contaminação em salas limpas. Funcionários que não seguem as diretrizes da sala limpa constituem um fator de alto risco. Basta que um funcionário cometa um erro ou se esqueça de uma etapa para que toda a sala limpa seja contaminada. A empresa só pode garantir a limpeza da sala limpa por meio de monitoramento contínuo e treinamento constante, visando uma taxa de contaminação zero.
Outras fontes importantes de contaminação são ferramentas e equipamentos. Se um carrinho ou uma máquina for apenas superficialmente limpo antes de entrar na sala limpa, pode introduzir microrganismos. Muitas vezes, os trabalhadores não sabem que equipamentos com rodas passam por cima de superfícies contaminadas ao serem empurrados para dentro da sala limpa. As superfícies (incluindo pisos, paredes, equipamentos, etc.) são rotineiramente testadas para contagem de microrganismos viáveis usando placas de contato especialmente projetadas contendo meios de cultura, como Ágar Tripticaseína de Soja (TSA) e Ágar Sabouraud Dextrose (SDA). O TSA é um meio de cultura desenvolvido para bactérias, e o SDA é um meio de cultura desenvolvido para fungos e leveduras. O TSA e o SDA são normalmente incubados em temperaturas diferentes, sendo o TSA exposto a temperaturas na faixa de 30-35 °C, que é a temperatura ideal para o crescimento da maioria das bactérias. A faixa de 20-25 °C é ideal para a maioria das espécies de fungos e leveduras.
O fluxo de ar já foi uma causa comum de contaminação, mas os sistemas de climatização (HVAC) de salas limpas atuais praticamente eliminaram a contaminação do ar. O ar em salas limpas é controlado e monitorado regularmente (por exemplo, diariamente, semanalmente, trimestralmente) quanto à contagem de partículas, contagem de microrganismos viáveis, temperatura e umidade. Filtros HEPA são usados para controlar a contagem de partículas no ar e têm a capacidade de filtrar partículas de até 0,2 µm. Esses filtros geralmente funcionam continuamente com uma vazão calibrada para manter a qualidade do ar na sala. A umidade geralmente é mantida em um nível baixo para evitar a proliferação de microrganismos, como bactérias e fungos, que preferem ambientes úmidos.
Na verdade, o nível mais alto e a fonte mais comum de contaminação em salas limpas é o operador.
As fontes e vias de entrada de contaminação não variam significativamente de um setor para outro, mas existem diferenças entre os setores em termos de níveis de contaminação toleráveis e intoleráveis. Por exemplo, os fabricantes de comprimidos ingeríveis não precisam manter o mesmo nível de limpeza que os fabricantes de agentes injetáveis que são introduzidos diretamente no corpo humano.
Os fabricantes de produtos farmacêuticos têm uma tolerância menor à contaminação microbiana do que os fabricantes de eletrônicos de alta tecnologia. Os fabricantes de semicondutores, que produzem produtos microscópicos, não podem aceitar qualquer contaminação por partículas para garantir a funcionalidade do produto. Portanto, essas empresas se preocupam apenas com a esterilidade do produto a ser implantado no corpo humano e com a funcionalidade do chip ou do telefone celular. Elas se preocupam relativamente menos com mofo, fungos ou outras formas de contaminação microbiana em salas limpas. Por outro lado, as empresas farmacêuticas se preocupam com todas as fontes de contaminação, vivas ou mortas.
A indústria farmacêutica é regulamentada pela FDA e deve seguir rigorosamente as Boas Práticas de Fabricação (BPF), pois as consequências da contaminação nesse setor são extremamente prejudiciais. Os fabricantes de medicamentos não só precisam garantir que seus produtos estejam livres de bactérias, como também são obrigados a manter documentação e rastreamento de todas as etapas do processo. Uma empresa de equipamentos de alta tecnologia pode enviar um laptop ou uma TV, desde que passe por sua auditoria interna. Mas para a indústria farmacêutica, a situação é bem diferente. Por isso, é crucial que uma empresa possua, utilize e documente os procedimentos operacionais de salas limpas. Devido a questões de custo, muitas empresas contratam serviços profissionais de limpeza externos.
Um programa abrangente de testes ambientais para salas limpas deve incluir partículas visíveis e invisíveis em suspensão no ar. Embora não haja exigência de que todos os contaminantes nesses ambientes controlados sejam identificados por microrganismos, o programa de controle ambiental deve incluir um nível adequado de identificação bacteriana das amostras extraídas. Existem muitos métodos de identificação bacteriana disponíveis atualmente.
O primeiro passo na identificação bacteriana, especialmente em isolamento de salas limpas, é o método de coloração de Gram, pois ele pode fornecer pistas interpretativas sobre a origem da contaminação microbiana. Se o isolamento e a identificação microbiana mostrarem cocos Gram-positivos, a contaminação pode ter origem humana. Se o isolamento e a identificação microbiana mostrarem bacilos Gram-positivos, a contaminação pode ter origem em poeira ou cepas resistentes a desinfetantes. Se o isolamento e a identificação microbiana mostrarem bacilos Gram-negativos, a fonte de contaminação pode ter sido água ou qualquer superfície úmida.
A identificação microbiana em salas limpas farmacêuticas é essencial, pois está relacionada a diversos aspectos da garantia da qualidade, como bioensaios em ambientes de produção; testes de identificação bacteriana em produtos finais; detecção de organismos não identificados em produtos estéreis e água; controle de qualidade em tecnologias de armazenamento por fermentação na indústria biotecnológica; e verificação de testes microbiológicos durante a validação. O método da FDA para confirmar a capacidade de sobrevivência de bactérias em um ambiente específico está se tornando cada vez mais comum. Quando os níveis de contaminação microbiana excedem o limite especificado ou os resultados dos testes de esterilidade indicam contaminação, é necessário verificar a eficácia dos agentes de limpeza e desinfecção e eliminar as fontes de contaminação.
Existem dois métodos para monitorar superfícies ambientais em salas limpas:
1. Placas de contato
Essas placas de cultura especiais contêm meio de crescimento estéril, preparado em uma quantidade superior à borda da placa. A tampa de contato cobre a superfície a ser amostrada, e quaisquer microrganismos visíveis na superfície aderem ao ágar e incubam. Essa técnica permite quantificar a quantidade de microrganismos visíveis em uma superfície.
2. Método de esfregaço
Este material é estéril e armazenado em um líquido estéril apropriado. O cotonete é aplicado na superfície a ser testada e o microrganismo é identificado pela recuperação do cotonete no meio de cultura. Os cotonetes são frequentemente usados em superfícies irregulares ou em áreas de difícil amostragem com uma placa de contato. A amostragem com cotonete é um teste mais qualitativo.
Data da publicação: 21/10/2024