Existem duas fontes principais de contaminação em salas limpas: partículas e microrganismos, que podem ser causados por fatores humanos e ambientais, ou por atividades relacionadas ao processo. Apesar de todos os esforços, a contaminação ainda penetrará na sala limpa. Os vetores de contaminação comuns incluem corpos humanos (células, cabelo), fatores ambientais como poeira, fumaça, névoa ou equipamentos (equipamentos de laboratório, equipamentos de limpeza) e técnicas e métodos de limpeza inadequados.
O principal vetor de contaminação são as pessoas. Mesmo com as vestimentas e os procedimentos operacionais mais rigorosos, operadores mal treinados representam a maior ameaça de contaminação em salas limpas. Funcionários que não seguem as diretrizes de salas limpas representam um fator de alto risco. Qualquer erro ou esquecimento de um passo por um funcionário pode levar à contaminação de toda a sala limpa. A empresa só pode garantir a limpeza da sala limpa por meio de monitoramento contínuo e atualização contínua de treinamentos, com taxa de contaminação zero.
Outras fontes importantes de contaminação são ferramentas e equipamentos. Se um carrinho ou uma máquina for apenas levemente limpo antes de entrar na sala limpa, pode trazer microrganismos. Muitas vezes, os trabalhadores não sabem que equipamentos com rodas rolam sobre superfícies contaminadas ao serem empurrados para dentro da sala limpa. As superfícies (incluindo pisos, paredes, equipamentos, etc.) são rotineiramente testadas para contagens viáveis usando placas de contato especialmente projetadas contendo meios de crescimento, como Ágar Trypticase Soy (TSA) e Ágar Sabouraud Dextrose (SDA). O TSA é um meio de crescimento projetado para bactérias, e o SDA é um meio de crescimento projetado para fungos e leveduras. O TSA e o SDA são normalmente incubados em temperaturas diferentes, com o TSA exposto a temperaturas na faixa de 30-35 °C, que é a temperatura ideal de crescimento para a maioria das bactérias. A faixa de 20-25 °C é ideal para a maioria das espécies de fungos e leveduras.
O fluxo de ar já foi uma causa comum de contaminação, mas os atuais sistemas de climatização para salas limpas praticamente eliminaram a contaminação do ar. O ar em salas limpas é controlado e monitorado regularmente (por exemplo, diariamente, semanalmente, trimestralmente) para contagem de partículas, contagem de partículas viáveis, temperatura e umidade. Filtros HEPA são usados para controlar a contagem de partículas no ar e têm a capacidade de filtrar partículas de até 0,2 µm. Esses filtros geralmente são mantidos em funcionamento contínuo a uma vazão calibrada para manter a qualidade do ar no ambiente. A umidade geralmente é mantida em um nível baixo para evitar a proliferação de micro-organismos, como bactérias e mofo, que preferem ambientes úmidos.
Na verdade, o nível mais alto e a fonte mais comum de contaminação em salas limpas é o operador.
As fontes e vias de entrada da contaminação não variam significativamente de setor para setor, mas existem diferenças entre os setores em termos de níveis toleráveis e intoleráveis de contaminação. Por exemplo, fabricantes de comprimidos ingeríveis não precisam manter o mesmo nível de limpeza que os fabricantes de agentes injetáveis que são introduzidos diretamente no corpo humano.
Os fabricantes de produtos farmacêuticos têm menor tolerância à contaminação microbiana do que os fabricantes de eletrônicos de alta tecnologia. Os fabricantes de semicondutores que produzem produtos microscópicos não podem aceitar qualquer contaminação por partículas para garantir a funcionalidade do produto. Portanto, essas empresas se preocupam apenas com a esterilidade do produto a ser implantado no corpo humano e com a funcionalidade do chip ou do celular. Elas se preocupam relativamente menos com mofo, fungos ou outras formas de contaminação microbiana em salas limpas. Por outro lado, as empresas farmacêuticas se preocupam com todas as fontes vivas e mortas de contaminação.
A indústria farmacêutica é regulamentada pela FDA e deve seguir rigorosamente as normas de Boas Práticas de Fabricação (BPF), pois as consequências da contaminação na indústria farmacêutica são muito prejudiciais. Os fabricantes de medicamentos não só precisam garantir que seus produtos estejam livres de bactérias, como também devem ter documentação e rastreamento de tudo. Uma empresa de equipamentos de alta tecnologia pode enviar um laptop ou uma TV, desde que passe por uma auditoria interna. Mas isso não é tão simples para a indústria farmacêutica, e é por isso que é crucial que uma empresa tenha, utilize e documente os procedimentos operacionais de sala limpa. Devido a considerações de custo, muitas empresas contratam serviços de limpeza profissionais externos para realizar os serviços.
Um programa abrangente de testes ambientais em salas limpas deve incluir partículas aéreas visíveis e invisíveis. Embora não haja exigência de que todos os contaminantes nesses ambientes controlados sejam identificados por microrganismos, o programa de controle ambiental deve incluir um nível adequado de identificação bacteriana nas extrações de amostras. Existem muitos métodos de identificação bacteriana disponíveis atualmente.
O primeiro passo na identificação bacteriana, especialmente quando se trata de isolamento em sala limpa, é o método de coloração de Gram, pois pode fornecer pistas interpretativas sobre a fonte de contaminação microbiana. Se o isolamento e a identificação microbiológica mostrarem cocos Gram-positivos, a contaminação pode ter vindo de humanos. Se o isolamento e a identificação microbiológica mostrarem bastonetes Gram-positivos, a contaminação pode ter vindo de poeira ou cepas resistentes a desinfetantes. Se o isolamento e a identificação microbiológica mostrarem bastonetes Gram-negativos, a fonte de contaminação pode ter vindo de água ou qualquer superfície molhada.
A identificação microbiana em salas limpas farmacêuticas é essencial, pois está relacionada a diversos aspectos da garantia da qualidade, como bioensaios em ambientes de fabricação; testes de identificação bacteriana em produtos finais; organismos não identificados em produtos estéreis e água; controle de qualidade da tecnologia de armazenamento por fermentação na indústria biotecnológica; e verificação de testes microbianos durante a validação. O método da FDA para confirmar a capacidade de sobrevivência de bactérias em um ambiente específico se tornará cada vez mais comum. Quando os níveis de contaminação microbiana excedem o nível especificado ou os resultados dos testes de esterilidade indicam contaminação, é necessário verificar a eficácia dos agentes de limpeza e desinfecção e eliminar a identificação de fontes de contaminação.
Existem dois métodos para monitorar superfícies ambientais de salas limpas:
1. Placas de contato
Essas placas de cultura especiais contêm meio de crescimento estéril, preparado para ficar acima da borda da placa. A tampa da placa de contato cobre a superfície a ser amostrada, e quaisquer microrganismos visíveis na superfície aderem à superfície do ágar e incubam. Essa técnica permite a visualização do número de microrganismos visíveis em uma superfície.
2. Método de cotonete
Este é estéril e armazenado em um líquido estéril adequado. O swab é aplicado na superfície de teste e o microrganismo é identificado pela recuperação do swab no meio. Os swabs são frequentemente usados em superfícies irregulares ou em áreas de difícil coleta com uma placa de contato. A coleta de amostras por swab é mais um teste qualitativo.
Horário da publicação: 21/10/2024