1. Finalidade: Este procedimento visa fornecer um procedimento padronizado para operações assépticas e proteção de salas estéreis.
2. Âmbito de aplicação: laboratório de testes biológicos
3. Pessoa Responsável: Testador Supervisor de CQ
4.Definição: Nenhum
5. Precauções de segurança
Realizar rigorosamente operações assépticas para evitar contaminação microbiana; os operadores devem desligar a lâmpada UV antes de entrar na sala estéril.
6.Procedimentos
6.1. A sala estéril deve ser equipada com uma sala de operação estéril e uma sala tampão. A limpeza da sala de operação estéril deve atingir a classe 10000. A temperatura interna deve ser mantida em 20-24°C e a umidade deve ser mantida em 45-60%. A limpeza da bancada limpa deve atingir a classe 100.
6.2. A sala estéril deve ser mantida limpa e é estritamente proibido acumular detritos para evitar contaminação.
6.3. Evite estritamente a contaminação de todos os equipamentos de esterilização e meios de cultura. Aqueles que estão contaminados devem parar de usá-los.
6.4. A sala estéril deve ser equipada com desinfetantes de concentração de trabalho, como solução de cresol a 5%, álcool a 70%, solução de clormetionina a 0,1%, etc.
6.5. A sala estéril deve ser esterilizada regularmente e limpa com desinfetante apropriado para garantir que a limpeza da sala estéril atenda aos requisitos.
6.6. Todos os instrumentos, instrumentos, pratos e outros itens que precisam ser levados para uma sala estéril devem ser bem embalados e esterilizados por métodos apropriados.
6.7. Antes de entrar na sala estéril, o pessoal deve lavar as mãos com sabão ou desinfetante e depois vestir roupas de trabalho especiais, sapatos, chapéus, máscaras e luvas na sala tampão (ou limpar as mãos novamente com etanol a 70%) antes de entrar na sala estéril. Realize operações em câmara bacteriana.
6.8. Antes de usar a sala estéril, a lâmpada ultravioleta da sala estéril deve ser ligada para irradiação e esterilização por mais de 30 minutos, e a bancada limpa deve ser ligada para soprar ar ao mesmo tempo. Após a conclusão da operação, a sala estéril deve ser limpa a tempo e depois esterilizada por luz ultravioleta por 20 minutos.
6.9. Antes da inspeção, a embalagem externa da amostra de teste deve ser mantida intacta e não deve ser aberta para evitar contaminação. Antes da inspeção, use bolas de algodão com álcool 70% para desinfetar a superfície externa.
6.10. Durante cada operação, deve ser feito um controle negativo para verificar a confiabilidade da operação asséptica.
6.11. Ao absorver líquido bacteriano, você deve usar uma bola de sucção para absorvê-lo. Não toque no canudo diretamente com a boca.
6.12. A agulha de inoculação deve ser esterilizada à chama antes e depois de cada utilização. Após resfriamento, a cultura pode ser inoculada.
6.13. Os canudos, tubos de ensaio, placas de Petri e demais utensílios contendo líquido bacteriano devem ser embebidos em balde de esterilização contendo solução de Lysol 5% para desinfecção, retirados e enxaguados após 24 horas.
6.14. Se houver líquido bacteriano derramado na mesa ou no chão, você deve derramar imediatamente solução de ácido carbólico a 5% ou Lysol a 3% na área contaminada por pelo menos 30 minutos antes de tratá-la. Quando as roupas de trabalho e os chapéus estiverem contaminados com fluido bacteriano, devem ser retirados imediatamente e lavados após a esterilização a vapor de alta pressão.
6.15. Todos os itens que contenham bactérias vivas devem ser desinfetados antes de serem enxaguados na torneira. É estritamente proibido poluir o esgoto.
6.16. O número de colônias em sala estéril deve ser verificado mensalmente. Com a bancada limpa aberta, pegue uma série de placas de Petri estéreis com um diâmetro interno de 90 mm e injete assepticamente cerca de 15 ml de meio de cultura nutriente ágar que foi derretido e resfriado a cerca de 45°C. Após a solidificação, coloque-o de cabeça para baixo entre 30 e 35ºC. Incubar por 48 horas em uma incubadora ℃. Após comprovar a esterilidade, pegue de 3 a 5 placas e coloque-as à esquerda, no meio e à direita da posição de trabalho. Após abrir a tampa e expor por 30 minutos, coloque-os de cabeça para baixo em uma incubadora de 30 a 35°C por 48 horas e retire-os. examinar. O número médio de bactérias diversas na placa em uma área limpa classe 100 não deve exceder 1 colônia, e o número médio em uma sala limpa classe 10000 não deve exceder 3 colônias. Se o limite for excedido, a sala estéril deverá ser completamente desinfetada até que inspeções repetidas atendam aos requisitos.
7. Consulte o capítulo (Método de inspeção de esterilidade) em "Métodos de inspeção higiênica de medicamentos" e "Práticas operacionais padrão da China para inspeção de medicamentos".
8. Departamento de Distribuição: Departamento de Gestão da Qualidade
Orientação técnica de sala limpa:
Após obter um ambiente estéril e materiais estéreis, devemos manter um estado estéril para estudar um microrganismo específico conhecido ou utilizar suas funções. Caso contrário, vários microrganismos externos podem facilmente se misturar. O fenômeno da mistura de microrganismos irrelevantes externos é chamado de bactérias contaminantes em microbiologia. Prevenir a contaminação é uma técnica crítica no trabalho microbiológico. A esterilização completa, por um lado, e a prevenção de contaminação, por outro, são dois aspectos da técnica asséptica. Além disso, devemos evitar que os microrganismos em estudo, especialmente os microrganismos patogénicos ou os microrganismos geneticamente modificados que não existem na natureza, escapem dos nossos recipientes experimentais para o ambiente externo. Para estes fins, em microbiologia, existem muitas medidas.
A sala estéril é geralmente uma pequena sala especialmente montada em um laboratório de microbiologia. Pode ser construída com chapas e vidro. A área não deve ser muito grande, cerca de 4 a 5 metros quadrados, e a altura deve ser de cerca de 2,5 metros. Uma sala tampão deve ser instalada fora da sala estéril. A porta da sala tampão e a porta da sala estéril não devem estar voltadas na mesma direção para evitar que o fluxo de ar traga bactérias diversas. Tanto a sala estéril quanto a sala tampão devem ser herméticas. Os equipamentos de ventilação interna devem possuir dispositivos de filtragem de ar. O piso e as paredes da sala estéril devem ser lisos, difíceis de acumular sujeira e fáceis de limpar. A superfície de trabalho deve estar nivelada. Tanto a sala estéril quanto a sala tampão estão equipadas com luzes ultravioletas. As luzes ultravioletas na sala estéril ficam a 1 metro de distância da superfície de trabalho. Os funcionários que entram na sala esterilizada devem usar roupas e chapéus esterilizados.
Atualmente, as salas esterilizadas existem principalmente em fábricas de microbiologia, enquanto os laboratórios gerais utilizam bancadas limpas. A principal função da bancada limpa é usar um dispositivo de fluxo de ar laminar para remover várias poeiras minúsculas, incluindo microorganismos na superfície de trabalho. O dispositivo elétrico permite que o ar passe pelo filtro hepa e depois entre na superfície de trabalho, de modo que a superfície de trabalho seja sempre mantida sob o controle do fluxo de ar estéril. Além disso, há uma cortina de ar de alta velocidade na lateral próxima ao exterior para evitar a entrada de ar bacteriano externo.
Em locais com condições difíceis, também podem ser utilizadas caixas estéreis de madeira em vez de bancada limpa. A caixa estéril possui estrutura simples e é fácil de movimentar. Existem dois orifícios na parte frontal da caixa, que são bloqueados pelas portas push-pull quando não estão em operação. Você pode estender os braços durante a operação. A parte superior frontal é equipada com vidro para facilitar o funcionamento interno. Dentro da caixa há uma lâmpada ultravioleta, e utensílios e bactérias podem ser colocados através de uma pequena porta lateral.
As técnicas operacionais assépticas atualmente não apenas desempenham um papel fundamental na pesquisa e aplicações microbiológicas, mas também são amplamente utilizadas em muitas biotecnologias. Por exemplo, tecnologia transgênica, tecnologia de anticorpos monoclonais, etc.
Horário da postagem: 06/03/2024