1. Objetivo: Este procedimento visa fornecer um método padronizado para operações assépticas e proteção de salas estéreis.
2. Âmbito de aplicação: laboratório de testes biológicos
3. Responsável: Supervisor de Controle de Qualidade/Testador
4. Definição: Nenhuma
5. Precauções de segurança
As operações devem ser realizadas em condições estritamente assépticas para evitar a contaminação microbiana; os operadores devem desligar a lâmpada UV antes de entrar na sala estéril.
6. Procedimentos
6.1. A sala estéril deve ser equipada com uma sala cirúrgica estéril e uma sala de transição. A limpeza da sala cirúrgica estéril deve atingir a classe 10000. A temperatura interna deve ser mantida entre 20 e 24 °C e a umidade relativa entre 45 e 60%. A limpeza da bancada limpa deve atingir a classe 100.
6.2. A sala estéril deve ser mantida limpa, sendo estritamente proibido o acúmulo de detritos para evitar contaminação.
6.3. Evite rigorosamente a contaminação de todos os equipamentos de esterilização e meios de cultura. Os equipamentos contaminados devem ser desativados.
6.4. A sala estéril deve ser equipada com desinfetantes em concentrações adequadas, como solução de cresol a 5%, álcool a 70%, solução de clormetionina a 0,1%, etc.
6.5. A sala estéril deve ser esterilizada e limpa regularmente com desinfetante apropriado para garantir que a limpeza da sala estéril atenda aos requisitos.
6.6. Todos os instrumentos, utensílios, recipientes e outros itens que precisam ser levados para a sala estéril devem ser embalados hermeticamente e esterilizados por métodos apropriados.
6.7. Antes de entrar na sala estéril, os funcionários devem lavar as mãos com sabão ou desinfetante e, em seguida, vestir roupas de trabalho especiais, calçados, toucas, máscaras e luvas na sala de transição (ou limpar as mãos novamente com etanol a 70%) antes de entrar na sala estéril. Realizar procedimentos na câmara bacteriana.
6.8. Antes de utilizar a sala estéril, a lâmpada ultravioleta deve ser ligada para irradiação e esterilização por mais de 30 minutos, e a bancada limpa deve ser ligada para ventilação simultânea. Após a conclusão da operação, a sala estéril deve ser limpa imediatamente e, em seguida, esterilizada com luz ultravioleta por 20 minutos.
6.9. Antes da inspeção, a embalagem externa da amostra de teste deve ser mantida intacta e não deve ser aberta para evitar contaminação. Antes da inspeção, utilize algodão embebido em álcool 70% para desinfetar a superfície externa.
6.10. Durante cada operação, um controle negativo deve ser realizado para verificar a confiabilidade da operação asséptica.
6.11. Ao absorver o líquido bacteriano, utilize a esfera de sucção para aspirar o líquido. Não toque o canudo diretamente na boca.
6.12. A agulha de inoculação deve ser esterilizada na chama antes e depois de cada utilização. Após o resfriamento, a cultura pode ser inoculada.
6.13. Os canudos, tubos de ensaio, placas de Petri e outros utensílios que contenham líquido bacteriano devem ser imersos em um balde de esterilização contendo solução de Lysol a 5% para desinfecção e retirados e enxaguados após 24 horas.
6.14. Caso haja derramamento de líquido bacteriano sobre a mesa ou o chão, aplique imediatamente uma solução de ácido carbólico a 5% ou Lysol a 3% na área contaminada e deixe agir por pelo menos 30 minutos antes de tratar a área afetada. Roupas e toucas de trabalho devem ser imediatamente retiradas e lavadas após esterilização a vapor de alta pressão.
6.15. Todos os itens que contenham bactérias vivas devem ser desinfetados antes de serem enxaguados em água corrente. É estritamente proibido poluir o esgoto.
6.16. O número de colônias na sala estéril deve ser verificado mensalmente. Com a bancada limpa aberta, pegue algumas placas de Petri estéreis com diâmetro interno de 90 mm e injete assepticamente cerca de 15 ml de meio de cultura de ágar nutritivo previamente descongelado e resfriado a cerca de 45 °C. Após a solidificação, coloque as placas invertidas em uma incubadora a 30-35 °C e incube por 48 horas. Após comprovar a esterilidade, pegue de 3 a 5 placas e coloque-as à esquerda, no centro e à direita da área de trabalho. Após abrir a tampa e expô-las por 30 minutos, coloque-as invertidas em uma incubadora a 30-35 °C por 48 horas e retire-as para exame. O número médio de bactérias diversas na placa em uma área limpa classe 100 não deve exceder 1 colônia, e o número médio em uma sala limpa classe 10000 não deve exceder 3 colônias. Caso o limite seja ultrapassado, a sala estéril deve ser completamente desinfetada até que inspeções repetidas atendam aos requisitos.
7. Consulte o capítulo (Método de Inspeção de Esterilidade) em "Métodos de Inspeção Higiênica de Medicamentos" e "Práticas Operacionais Padrão da China para Inspeção de Medicamentos".
8. Departamento de Distribuição: Departamento de Gestão da Qualidade
Orientações técnicas para salas limpas:
Após a obtenção de um ambiente e materiais estéreis, devemos manter esse estado de esterilidade para estudar um microrganismo específico conhecido ou utilizar suas funções. Caso contrário, diversos microrganismos externos podem se misturar facilmente. O fenômeno da mistura de microrganismos irrelevantes provenientes do exterior é chamado de contaminação bacteriana em microbiologia. A prevenção da contaminação é uma técnica crucial no trabalho microbiológico. A esterilização completa, por um lado, e a prevenção da contaminação, por outro, são dois aspectos da técnica asséptica. Além disso, devemos impedir que os microrganismos em estudo, especialmente os patogênicos ou geneticamente modificados que não existem na natureza, escapem dos nossos recipientes experimentais para o ambiente externo. Para esses fins, existem diversas medidas em microbiologia.
A sala estéril geralmente é uma pequena sala especialmente preparada em um laboratório de microbiologia. Pode ser construída com placas de madeira e vidro. A área não deve ser muito grande, cerca de 4 a 5 metros quadrados, e a altura deve ser de aproximadamente 2,5 metros. Uma sala de transição deve ser instalada ao lado da sala estéril. As portas da sala de transição e da sala estéril não devem estar voltadas para a mesma direção para evitar a entrada de bactérias contaminadas pelo fluxo de ar. Tanto a sala estéril quanto a sala de transição devem ser herméticas. O sistema de ventilação interna deve possuir dispositivos de filtragem de ar. O piso e as paredes da sala estéril devem ser lisos, dificultando o acúmulo de sujeira e facilitando a limpeza. A superfície de trabalho deve ser nivelada. Tanto a sala estéril quanto a sala de transição são equipadas com luz ultravioleta. As lâmpadas ultravioleta na sala estéril devem estar a 1 metro de distância da superfície de trabalho. Os funcionários que entrarem na sala estéril devem usar roupas e toucas esterilizadas.
Atualmente, as salas estéreis são encontradas principalmente em fábricas de microbiologia, enquanto os laboratórios em geral utilizam bancadas limpas. A principal função da bancada limpa é utilizar um dispositivo de fluxo laminar de ar para remover diversas partículas finas, incluindo microrganismos, da superfície de trabalho. O dispositivo elétrico permite que o ar passe por um filtro HEPA e, em seguida, entre na superfície de trabalho, mantendo-a sempre sob controle de fluxo de ar estéril. Além disso, há uma cortina de ar de alta velocidade na lateral próxima ao exterior para impedir a entrada de ar contaminado por bactérias externas.
Em locais com condições difíceis, caixas estéreis de madeira também podem ser usadas em vez de bancadas limpas. A caixa estéril tem uma estrutura simples e é fácil de mover. Há duas aberturas na parte frontal da caixa, que são bloqueadas por portas de correr quando não estão em uso. É possível estender os braços durante o manuseio. A parte superior frontal é equipada com vidro para facilitar a manipulação interna. Há uma lâmpada ultravioleta dentro da caixa, e utensílios e bactérias podem ser introduzidos por uma pequena porta lateral.
As técnicas de operação asséptica desempenham atualmente um papel fundamental não apenas na pesquisa e nas aplicações microbiológicas, mas também são amplamente utilizadas em diversas biotecnologias. Por exemplo, na tecnologia transgênica, na tecnologia de anticorpos monoclonais, etc.
Data da publicação: 06/03/2024