1. Objetivo: Este procedimento visa fornecer um procedimento padronizado para operações assépticas e proteção de salas estéreis.
2. Escopo de aplicação: Laboratório de Testes Biológicos
3. Pessoa responsável: testador de supervisor de QC
4. Definição: Nenhum
5. Precauções de segurança
Executar estritamente operações assépticas para prevenir a contaminação microbiana; Os operadores devem desligar a lâmpada UV antes de entrar na sala estéril.
6. Procedimentos
6.1. A sala estéril deve estar equipada com uma sala de operação estéril e uma sala de buffer. A limpeza da sala de operação estéril deve atingir a classe 10000. A temperatura interna deve ser mantida a 20-24 ° C e a umidade deve ser mantida em 45-60%. A limpeza do banco limpo deve atingir a classe 100.
6.2. A sala estéril deve ser mantida limpa, e é estritamente proibido empilhar detritos para impedir a contaminação.
6.3. Impedir estritamente a contaminação de todos os equipamentos de esterilização e meios de cultura. Aqueles que estão contaminados devem parar de usá -los.
6.4. A sala estéril deve estar equipada com desinfetantes de concentração de trabalho, como solução de Cresol a 5%, álcool a 70%, solução a 0,1% de clormetionina, etc.
6.5. A sala estéril deve ser regularmente esterilizada e limpa com desinfetante apropriado para garantir que a limpeza da sala estéril atenda aos requisitos.
6.6. Todos os instrumentos, instrumentos, pratos e outros itens que precisam ser trazidos para a sala estéril devem ser firmemente embrulhados e esterilizados por métodos apropriados.
6.7. Antes de entrar na sala estéril, os funcionários devem lavar as mãos com sabão ou desinfetante e, em seguida, trocar de roupa, sapatos, chapéus, máscaras e luvas especiais na sala tampão (ou limpar as mãos novamente com etanol a 70%) antes de entrar na sala estéril. Execute operações na câmara bacteriana.
6.8. Antes de usar a sala estéril, a lâmpada ultravioleta na sala estéril deve ser ligada para irradiação e esterilização por mais de 30 minutos, e o banco limpo deve ser ativado para soprar o ar ao mesmo tempo. Após a conclusão da operação, a sala estéril deve ser limpa no tempo e depois esterilizada pela luz ultravioleta por 20 minutos.
6.9. Antes da inspeção, a embalagem externa da amostra de teste deve ser mantida intacta e não deve ser aberta para evitar a contaminação. Antes da inspeção, use bolas de algodão álcool a 70% para desinfetar a superfície externa.
6.10. Durante cada operação, um controle negativo deve ser feito para verificar a confiabilidade da operação asséptica.
6.11. Ao absorver líquido bacteriano, você deve usar uma bola de sucção para absorvê -la. Não toque no canudo diretamente com a boca.
6.12. A agulha de inoculação deve ser esterilizada por chama antes e após cada uso. Após o resfriamento, a cultura pode ser inoculada.
6.13. Os canudos, tubos de teste, placas de Petri e outros utensílios contendo líquido bacteriano devem ser embebidos em um balde de esterilização contendo solução de 5% de lisol para desinfecção e retirada e enxaguada após 24 horas.
6.14. Se houver líquido bacteriano derramado na mesa ou no piso, você deve derramar imediatamente a 5% de solução de ácido carbólico ou 3% de lisol na área contaminada por pelo menos 30 minutos antes de tratá -lo. Quando roupas de trabalho e chapéus são contaminados com líquido bacteriano, eles devem ser retirados imediatamente e lavados após esterilização a vapor de alta pressão.
6.15. Todos os itens que contêm bactérias vivos devem ser desinfetados antes de serem lavados sob a torneira. É estritamente proibido poluir o esgoto.
6.16. O número de colônias na sala estéril deve ser verificado mensalmente. Com o banco limpo aberto, pegue uma série de placas de Petri estéreis com um diâmetro interno de 90 mm e injete assepticamente cerca de 15 ml de meio de cultura de ágar nutrientes que foi derretido e resfriado a cerca de 45 ° C. Após a solidificação, coloque -o de cabeça para baixo de 30 a 35 incubato por 48 horas em uma incubadora. Depois de provar a esterilidade, pegue de 3 a 5 placas e coloque -as na esquerda, no meio e na direita da posição de trabalho. Depois de abrir a tampa e expor -os por 30 minutos, coloque -os de cabeça para baixo em uma incubadora de 30 a 35 ° C por 48 horas e retire -as. examinar. O número médio de bactérias diversas na placa em uma área limpa da classe 100 não deve exceder 1 colônia, e o número médio em uma sala limpa da classe 10000 não deve exceder 3 colônias. Se o limite for excedido, a sala estéril deve ser completamente desinfetada até que as inspeções repetidas atendam aos requisitos.
7. Consulte o capítulo (método de inspeção de esterilidade) em "métodos de inspeção higiênica de medicamentos" e "práticas operacionais padrão da China para inspeção de drogas".
8. Departamento de Distribuição: Departamento de Gerenciamento da Qualidade
Orientação técnica da sala limpa:
Após obter um ambiente estéril e materiais estéreis, devemos manter um estado estéril para estudar um microorganismo conhecido específico ou utilizar suas funções. Caso contrário, vários microorganismos de fora podem se misturar facilmente. O fenômeno da mistura de microorganismos irrelevantes de fora é chamado de bactérias contaminantes na microbiologia. Prevenir a contaminação é uma técnica crítica no trabalho microbiológico. A esterilização completa, por um lado, e a prevenção da contaminação, por outro, são dois aspectos da técnica asséptica. Além disso, devemos impedir que os microorganismos em estudo, especialmente microorganismos patogênicos ou microorganismos geneticamente modificados que não existem na natureza, desde a fuga de nossos recipientes experimentais para o ambiente externo. Para esses propósitos, na microbiologia, existem muitas medidas.
A sala estéril é geralmente uma pequena sala criada especialmente no laboratório de microbiologia. Pode ser construído com folhas e vidro. A área não deve ser muito grande, cerca de 4-5 metros quadrados, e a altura deve ser de cerca de 2,5 metros. Uma sala de buffer deve ser montada fora da sala estéril. A porta da sala tampão e a porta da sala estéril não devem enfrentar a mesma direção para impedir que o fluxo de ar traga bactérias diversas. A sala estéril e a sala de buffer devem ser herméticas. O equipamento de ventilação interno deve ter dispositivos de filtragem de ar. O piso e as paredes da sala estéril devem ser suaves, difíceis de abrigar a sujeira e fáceis de limpar. A superfície do trabalho deve estar nivelada. Tanto a sala estéril quanto a sala tampão estão equipadas com luzes ultravioletas. As luzes ultravioletas na sala estéril estão a 1 metro da superfície de trabalho. A equipe que entra na sala estéril deve usar roupas e chapéus esterilizados.
Atualmente, as salas estéreis existem principalmente nas fábricas de microbiologia, enquanto os laboratórios gerais usam bancada limpa. A principal função do banco limpo é usar o dispositivo de fluxo de ar laminar para remover vários pequenos poeiras, incluindo microorganismos na superfície do trabalho. O dispositivo elétrico permite que o ar passe através do filtro HEPA e entre na superfície do trabalho, para que a superfície de trabalho seja sempre mantida sob o controle do ar estéril. Além disso, há uma cortina de ar de alta velocidade ao lado do exterior para impedir a entrada de ar bacteriano externo.
Em locais com condições difíceis, caixas estéreis de madeira também podem ser usadas em vez de bancada limpa. A caixa estéril tem uma estrutura simples e é fácil de mover. Existem dois orifícios na frente da caixa, que são bloqueados por portas push-pull quando não estão em operação. Você pode estender os braços durante a operação. A parte superior da frente está equipada com vidro para facilitar a operação interna. Há uma lâmpada ultravioleta interna, e utensílios e bactérias podem ser colocados através de uma pequena porta ao lado.
Atualmente, as técnicas de operação assépticas não apenas desempenham um papel fundamental na pesquisa e aplicações microbiológicas, mas também são amplamente utilizadas em muitas biotecnologias. Por exemplo, tecnologia transgênica, tecnologia de anticorpos monoclonais, etc.
Hora de postagem: mar-06-2024