1. Objetivo: Este procedimento visa fornecer um procedimento padronizado para operações assépticas e proteção de salas estéreis.
2. Âmbito de aplicação: laboratório de testes biológicos
3. Responsável: Supervisor de CQ Testador
4. Definição: Nenhuma
5. Precauções de segurança
Execute operações rigorosamente assépticas para evitar contaminação microbiana; os operadores devem desligar a lâmpada UV antes de entrar na sala estéril.
6. Procedimentos
6.1. A sala estéril deve ser equipada com uma sala cirúrgica estéril e uma sala de buffer. A limpeza da sala cirúrgica estéril deve atingir a classe 10000. A temperatura interna deve ser mantida entre 20 e 24°C e a umidade entre 45 e 60%. A limpeza da bancada de limpeza deve atingir a classe 100.
6.2. A sala estéril deve ser mantida limpa, sendo estritamente proibido acumular detritos para evitar contaminação.
6.3. Previna rigorosamente a contaminação de todos os equipamentos de esterilização e meios de cultura. Aqueles que estiverem contaminados devem interromper o uso.
6.4. A sala estéril deve ser equipada com desinfetantes de concentração de trabalho, como solução de cresol a 5%, álcool a 70%, solução de clormetionina a 0,1%, etc.
6.5. A sala estéril deve ser regularmente esterilizada e limpa com desinfetante apropriado para garantir que a limpeza da sala estéril atenda aos requisitos.
6.6. Todos os instrumentos, utensílios, pratos e outros itens que precisem ser levados para a sala estéril devem ser bem embalados e esterilizados por métodos apropriados.
6.7. Antes de entrar na sala estéril, os funcionários devem lavar as mãos com sabão ou desinfetante e, em seguida, trocar de roupa, calçados, gorros, máscaras e luvas especiais na sala de proteção (ou limpar as mãos novamente com etanol 70%) antes de entrar na sala estéril. Realizar operações na câmara bacteriana.
6.8. Antes de utilizar a sala estéril, a lâmpada ultravioleta da sala estéril deve ser ligada para irradiação e esterilização por mais de 30 minutos, e a bancada limpa deve ser ligada para insuflação de ar simultaneamente. Após a conclusão da operação, a sala estéril deve ser limpa a tempo e, em seguida, esterilizada com luz ultravioleta por 20 minutos.
6.9. Antes da inspeção, a embalagem externa da amostra de teste deve ser mantida intacta e não deve ser aberta para evitar contaminação. Antes da inspeção, use bolas de algodão com álcool 70% para desinfetar a superfície externa.
6.10. Durante cada operação, um controle negativo deve ser realizado para verificar a confiabilidade da operação asséptica.
6.11. Ao absorver o líquido bacteriano, você deve usar uma bola de sucção para absorvê-lo. Não toque o canudo diretamente com a boca.
6.12. A agulha de inoculação deve ser esterilizada por chama antes e após cada uso. Após o resfriamento, a cultura pode ser inoculada.
6.13. Os canudos, tubos de ensaio, placas de Petri e outros utensílios contendo líquido bacteriano devem ser mergulhados em um balde de esterilização contendo solução de Lysol a 5% para desinfecção e retirados e enxaguados após 24 horas.
6.14. Se houver líquido bacteriano derramado na mesa ou no chão, despeje imediatamente solução de ácido carbólico a 5% ou Lysol a 3% na área contaminada por pelo menos 30 minutos antes de tratá-la. Se roupas de trabalho e chapéus estiverem contaminados com fluido bacteriano, eles devem ser retirados imediatamente e lavados após esterilização a vapor de alta pressão.
6.15. Todos os itens que contenham bactérias vivas devem ser desinfetados antes de serem enxaguados na torneira. É estritamente proibido poluir o esgoto.
6.16. O número de colônias na sala estéril deve ser verificado mensalmente. Com a bancada limpa aberta, pegue algumas placas de Petri estéreis com diâmetro interno de 90 mm e injete assepticamente cerca de 15 ml de meio de cultura de ágar nutriente derretido e resfriado a cerca de 45 °C. Após a solidificação, coloque-as de cabeça para baixo a uma temperatura de 30 a 35 °C. Incube por 48 horas em uma incubadora a ℃. Após comprovar a esterilidade, pegue de 3 a 5 placas e coloque-as à esquerda, no meio e à direita da posição de trabalho. Após abrir a tampa e expô-las por 30 minutos, coloque-as de cabeça para baixo em uma incubadora a 30 a 35 °C por 48 horas e retire-as. Examine. O número médio de bactérias diversas na placa em uma área limpa de classe 100 não deve exceder 1 colônia, e o número médio em uma sala limpa de classe 10000 não deve exceder 3 colônias. Se o limite for excedido, a sala estéril deverá ser completamente desinfetada até que inspeções repetidas atendam aos requisitos.
7. Consulte o capítulo (Método de inspeção de esterilidade) em "Métodos de inspeção higiênica de medicamentos" e "Práticas operacionais padrão da China para inspeção de medicamentos".
8. Departamento de Distribuição: Departamento de Gestão da Qualidade
Orientação técnica para salas limpas:
Após obter um ambiente estéril e materiais estéreis, devemos manter um estado estéril para estudar um microrganismo específico conhecido ou utilizar suas funções. Caso contrário, vários microrganismos externos podem facilmente se misturar. O fenômeno da mistura de microrganismos irrelevantes de fora é chamado de bactérias contaminantes em microbiologia. A prevenção da contaminação é uma técnica crítica no trabalho microbiológico. A esterilização completa, por um lado, e a prevenção da contaminação, por outro, são dois aspectos da técnica asséptica. Além disso, devemos evitar que os microrganismos em estudo, especialmente microrganismos patogênicos ou microrganismos geneticamente modificados que não existem na natureza, escapem de nossos recipientes experimentais para o ambiente externo. Para esses fins, em microbiologia, existem muitas medidas.
A sala estéril é geralmente uma sala pequena especialmente configurada em laboratório de microbiologia. Pode ser construída com folhas e vidro. A área não deve ser muito grande, cerca de 4-5 metros quadrados, e a altura deve ser de cerca de 2,5 metros. Uma sala de buffer deve ser configurada fora da sala estéril. A porta da sala de buffer e a porta da sala estéril não devem estar voltadas para a mesma direção para evitar que o fluxo de ar traga bactérias diversas. Tanto a sala estéril quanto a sala de buffer devem ser herméticas. O equipamento de ventilação interna deve ter dispositivos de filtragem de ar. O piso e as paredes da sala estéril devem ser lisos, difíceis de acumular sujeira e fáceis de limpar. A superfície de trabalho deve ser nivelada. Tanto a sala estéril quanto a sala de buffer são equipadas com luzes ultravioleta. As luzes ultravioleta na sala estéril estão a 1 metro de distância da superfície de trabalho. Os funcionários que entram na sala estéril devem usar roupas e chapéus esterilizados.
Atualmente, as salas estéreis são predominantemente encontradas em fábricas de microbiologia, enquanto laboratórios em geral utilizam bancadas limpas. A principal função da bancada limpa é utilizar um dispositivo de fluxo de ar laminar para remover diversas partículas de poeira, incluindo microrganismos, presentes na superfície de trabalho. O dispositivo elétrico permite que o ar passe pelo filtro HEPA e entre na superfície de trabalho, mantendo-a sempre sob o controle do fluxo de ar estéril. Além disso, há uma cortina de ar de alta velocidade na lateral, próxima à parte externa, para impedir a entrada de ar bacteriano externo.
Em locais com condições difíceis, caixas estéreis de madeira também podem ser usadas em vez de bancadas limpas. A caixa estéril tem uma estrutura simples e é fácil de mover. Há dois orifícios na parte frontal da caixa, que são bloqueados por portas de empurrar quando não estão em operação. Você pode estender os braços durante a operação. A parte superior da frente é equipada com vidro para facilitar a operação interna. Há uma lâmpada ultravioleta dentro da caixa, e utensílios e bactérias podem ser colocados através de uma pequena porta lateral.
As técnicas de operação asséptica atualmente não só desempenham um papel fundamental na pesquisa e aplicações microbiológicas, como também são amplamente utilizadas em diversas biotecnologias. Por exemplo, tecnologia transgênica, tecnologia de anticorpos monoclonais, etc.
Horário da postagem: 06/03/2024